抗TRPC6多肽单克隆抗体的制备与鉴定

目的 制备抗TRPC6多肽单克降抗体,并对其免疫学和生物学特性进行鉴定.方法 采用TRPC6多肽偶联血蓝蛋白(KLH)为抗原,免疫Balb/c小鼠,取血清效价高者脾细胞与Ag8.653骨髓瘤细胞进行融合.采用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞,以及测定单克隆抗体的特性、效价及其相对亲和力；采用单克隆抗体亚类检测试剂盒鉴定Ig亚型；并经有限稀释法克隆化培养获得杂交瘤细胞株；采用秋水仙素阻断法鉴定杂交瘤细胞株染色体.结果 获得3株能稳定分泌抗TRPC6多肽的单克隆抗体,分别命名为A2、F11和H8;抗体Ig亚类均为IgG1型,染色体均在89±7条的范围内；相对亲和力结果F11为6μg/ml,A2、H8为12.5μg/ml.结论 抗TRPC6多肽单克隆抗体的成功制备,为TRPC6的免疫学检测方法的建立奠定基础.