抗人NRP-1单克隆抗体对肝癌HepG2细胞株的生长抑制作用及机制初探

目的 研究抗人神经纤毛蛋白-1 (Neuropilin1,NRP-1)单克隆抗体对肝癌HepG2细胞的生长抑制作用及其机制.方法 小鼠腹水法制备抗NRP-1单克隆抗体(NRP-1 mAb)并用rProteinA亲和柱纯化抗体,间接ELISA检测抗体的滴度水平.Western blot检测NRP-1 mAb对HepG2细胞的特异性,细胞免疫荧光和流式细胞术检测NRP-1蛋白在肝癌细胞株HepG2上的表达,MTT法检测NRP-1 mAb对HepG2的生长抑制作用,Westem blot检测ERK1/2、P-ERK1/2、Akt、P-Akt蛋白的表达水平.结果 SDS-PAGE和间接ELISA检测纯化的NRP-1 mAb纯度为95％以上,效价为1×10-6;Western blot检测结果显示NRP-1 mAb可与HepG2细胞膜上的NRP-1蛋白特异性结合.细胞免疫荧光染色结果显示NRP-1定位于HepG2细胞膜,流式细胞术结果显示NRP-1蛋白在HepG2细胞上表达水平较高;MTT法检测结果显示NRP-1 mAb对HepG2细胞有生长抑制作用.Western blot检测到在不同浓度NRP-1 mAb作用下,HepG2细胞裂解液P-ERK1/2、P-Akt蛋白的条带信号逐渐减弱.结论 纯化的NRP-1mAb能抑制HepG2细胞的生长,其抑制作用是通过EGF和HGF信号通路实现的.