表达鸭源鸡杆菌flfA的重组乳酸杆菌构建及口服免疫效果评价

蛋鸡(Gallus gallus domesticus)输卵管炎与输卵管囊肿是危害养禽业的重要疫病,引起该病的病原较多,其中鸭源鸡杆菌(Gallibacterium anatis)是比较常见的病原.目前,乳酸菌作为食品级的表达载体在研制活载体疫苗中被广泛应用.本研究以干酪乳酸杆菌(Lactobacillus casei,CECT5276)作为递呈抗原的活菌载体,构建能够稳定表达鸭源鸡杆菌菌毛FlfA蛋白的重组干酪乳酸杆菌,并初步评价其免疫效果.首先将鸭源鸡杆菌flfA基因克隆至穿梭表达质粒pMG36e,然后电转化干酪乳酸杆菌,对重组菌中FlfA蛋白表达和重组菌生长状况、稳定性、存留性能及耐受力等进行检测分析,初步评价重组菌的免疫效果.SDS-PAGE和Western blot分析表明,重组干酪乳酸杆菌成功表达分子量约为20.3 kD的融合蛋白,该蛋白能与兔抗鸭源鸡杆菌阳性血清发生反应,具有反应原性;生长状况及稳定性等分析显示,目的基因的插入对干酪乳酸杆菌生长无影响,可在宿主菌中稳定遗传;在模拟肠液、胃液及高盐环境中均有较好的耐受力;免疫后第14、28、42 d免疫血清及肠道黏液的特异性IgG和sIgA的抗体水平均高于空载体组和PBS对照组(P<0.05);动物攻毒试验结果显示,3组受试鸡腹腔注射鸭源鸡杆菌PDS-RZ-1-SLG菌株后均未见死亡,但是免疫重组菌的鸡脏器中鸭源鸡杆菌分离率低于空载体组和PBS组,提示重组菌对鸡具有一定的免疫保护作用.本研究可为鸭源鸡杆菌口服疫苗研究提供参考依据.