尼罗罗非鱼p38MAPK多克隆抗体的制备及鉴定

p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)在生物自身免疫调节过程中起着重要的作用.为探讨p38MAPK在尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)免疫应答中的作用机制,本研究全基因合成p38MAPK部分编码序列,构建了重组质粒pET-28a-p38MAPK,并成功在大肠杆菌(Escherichia coli)中诱导表达;诱导表达的蛋白经Ni-NTA树脂层析柱纯化后,免疫新西兰白兔(Oryctolagus cuniculus)制备了尼罗罗非鱼p38MAPK多克隆抗体,并用多克隆抗体检测尼罗罗非鱼不同组织中p38MAPK蛋白表达情况.研究结果显示,诱导表达的重组蛋白约为23 kD,主要以包涵体的形式存在,酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和Western blot分析表明,所制备抗体效价达到1:256000,且能特异性识别p38MAPK蛋白.组织表达分析表明,p38MAPK在尼罗罗非鱼各组织中广泛分布,在卵巢,脑和肌肉中表达最强,头肾和血液次之,皮肤和鳃表达较弱,肝、脾、肠和心脏表达最弱.本研究为深入了解尼罗罗非鱼抗病免疫提供了基础资料.