基于脂蛋白P80的滑液支原体抗体ELISA检测方法的建立及应用

[目的]研究滑液支原体(Mycoplasma synoviae,MS)脂蛋白P80的免疫反应性及其在MS血清抗体ELISA检测中的应用.[方法]对MS P80的氨基酸序列进行生物信息学分析、原核表达和纯化,并用免疫印迹法分析其与6种不同MS分离株阳性血清的免疫反应性以及与其他禽病原血清的交叉反应性;运用纯化的MS P80表达蛋白作为包被抗原建立了MS血清抗体的间接ELISA检测方法,对其敏感性和重复性进行检测;比较检测了与美国爱德士检测试剂盒对50份临床血清样品的阳性符合率.[结果]生物信息学分析预测MS P80蛋白为脂蛋白且含有信号肽,其在MS种内同源性高达98％-100％,与其他种属P80蛋白同源性在25％-34％之间,成功表达和纯化了MS P80重组蛋白(rMS P80);Western blotting分析表明纯化的rMS P80具有良好的免疫反应性和特异性;运用rMS P80建立的MS血清ELISA抗体检测方法可对不同株MS阳性血清进行抗体效价检测,而对其他禽病原阳性血清均无交叉反应性;该检测方法的批内变异系数小于5％,批间变异系数小于10％,重复性良好;与美国IDEXX检测试剂盒比较,本文建立的ELISA抗体检测方法敏感性更高,阳性符合率为75％,阴性符合率为89.47％,总样本符合率为86％.[结论]MS P80具有较好的免疫反应性、种内保守性和种间特异,并且可用作MS抗体检测的靶标抗原.