草鱼自噬相关基因Beclin1的克隆及其在MC-LR胁迫下的表达特征

为评估微囊藻毒素-LR(MC-LR)对鱼类自噬的影响,根据转录组测序结果得到的EST序列,采用RACE技术获得了草鱼(Ctenopharygodon idella)自噬基因Beclin1(CiBeclin1)的cDNA全长序列.该基因序列全长1590 bp,包括1344 bp的开放阅读框,编码447个氨基酸,分子量为51.2 kD,理论等电点为4.88.CiBeclin1包含1个BH3和1个ECD结构域.CiBeclin1氨基酸序列与其他物种的相似性为88％—98％,构建的进化树显示CiBeclin1与稀有鲫(Gobiocypris rarus)的Beclin1亲缘关系最近.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测结果表明,CiBeclin1在肝、肾、脾等10种不同组织中均广泛表达,但在肝脏组织中的相对表达量最丰富,显著高于相对表达量最低的头肾组织(P<0.05).在不同剂量(25和100μg MC-LR/kg BW)MC-LR胁迫24h、48h、72h和96h后,草鱼肝脏中CiBeclin1表达量均显著低于对照组的表达水平,研究结果表明,MC-LR能抑制草鱼CiBeclin1的表达,但MC-LR是否在该剂量下诱导了草鱼的自噬还有待于进一步研究.