雨生红球藻FACHB-712营养细胞和厚壁孢子低温保藏效果及优化

以高产虾青素的雨生红球藻(Haematococcus pluvialis Flotow) FACHB-712藻株为材料,研究2种细胞形态(营养细胞和厚壁孢子)在低温保藏下的复苏率及其差异原因.结果显示,采用两步法(先预冻降温后再投入液氮中)冻存其营养细胞,在不同冻存条件下,其存活率均低于5％,以10％甘油作为保护剂、冻存速率为0.5℃/min、预冻温度为-40℃、保留30 min,然后再投入液氮罐(-196℃)中保藏,其存活率可达到13.3％.采用两步法冻存厚壁孢子,其复苏存活率高达66.13％,复苏萌发后细胞的生长特性、虾青素含量与液氮保藏前无明显差异(P＞0.05).对液氮保藏前后藻细胞形态和超微结构观察结果表明,超低温保藏后,营养细胞的结构受到较大损伤,而厚壁孢子受到的损伤相对较小.当添加不同保护剂后,直接将厚壁孢子分别冻存在-20℃、-80℃低温及液氮中,发现-80℃低温冻存处理组的复苏存活率相对较高,可达27％.研究表明采用两步法先预冻降温后再投入液氮中冻存厚壁孢子,是长期保藏雨生红球藻FACHB-712的最佳方法,也可采用一步法将厚壁孢子冻存于-80℃冰箱中.