人牙髓干细胞条件培养基通过AMPK/PGC-1α途径改善氯化钴诱导的颏舌肌成肌细胞低氧损伤

目的:研究氯化钴(CoCl2)模拟的低氧对颏舌肌成肌细胞活性和氧化应激的影响,探讨人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)条件培养基(conditioned medium,CM)保护作用的机制与AMPK/PGC-1α通路的关系.方法:分离、培养及鉴定hDPSCs,通过超滤浓缩法提取条件培养基;分离、培养小鼠颏舌肌成肌细胞,分为对照组、CM组、CoCl2组、CoCl2+CM组.采用CCK-8法检测颏舌肌成肌细胞的活性,分别使用DCFH-DA和MitoSOX Red评估细胞内和线粒体活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,实时定量PCR分析NRF-1、NRF-2线粒体相关基因的表达,Western印迹法检测PGC-1α、p-AMPK、总AMPK蛋白表达.采用SPSS 22.0软件包对数据进行统计学分析.结果:颏舌肌成肌细胞经过200μmol/L CoCl2处理24 h后增殖显著下降(P<0.05),细胞内和线粒体内ROS含量显著上升(P<0.05);与CoCl2组相比,加入hDPSCs-CM后,细胞活性显著增加(P<0.05),胞内和线粒体内ROS含量显著降低(P<0.05);hDPSCs-CM显著上调颏舌肌成肌细胞中pAMPK和PGC-1α蛋白的表达水平以及PGC-1α下游的线粒体效应物NRF-1、NRF-2的mRNA表达水平(P<0.05).结论:人牙髓干细胞条件培养基能减轻CoCl2诱导的颏舌肌成肌细胞低氧损伤,其机制可能与AMPK/PGC-1α通路的调节有关.