大黄素衍生物对伯基特淋巴瘤细胞株周期、凋亡、NF-KB通路的作用研究

目的:探讨新型大黄素衍生物YX-18对伯基特淋巴瘤(BL)细胞的作用和机制.方法:不同浓度YX-18分别作用BL细胞株CA46和Raji细胞,MTT法检测YX-18对BL细胞株CA46和Raji增殖的影响,Annexin V-PE/7-AAD双染法检测YX-18对CA46和Raji细胞凋亡的影响,PI/RNase染色法检测YX-18对CA46和Raji细胞周期的影响,JC-1法检测YX-18作用后细胞线粒体膜电位的变化及DAPI染色检测细胞凋亡形态,Western blot检测YX-18对NF-κB通路蛋白(P65、P-P65、IκB、P-IκB)在胞浆和胞细胞核中的分布变化,细胞周期相关蛋白P21、CDK2、P-CDK2、Cycling D1、Cycling E1以及凋亡、增殖相关蛋白Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、C-MYC、BCL-2的表达变化,实时荧光定量PCR技术检测YX-18对CA46、Raji细胞的C-MYC、Ki-67的mRNA和Raji(EBV+)细胞EBV的EBEA-1、EBER的mRNA表达的影响.结果:大黄素衍生物YX-18能有效抑制BL细胞株CA46和Raji的增殖并呈时间依赖效应(24,48和72 h分别rCA46=0.89、0.75和0.75,rRaji=0.87、0.73和0.64).作用两种细胞24 h的IC50分别为1.77+0.04和1.97±0.22μmol/L.YX-18 2.0、4.0μmol/L分别作用两种细胞24 h均出现明显凋亡,与药物浓度呈正相关(rcA46=0.99,rRaii=0.92),且两种细胞Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9不同程度被活化.YX-18 1.0、2.0μmol/L作用CA46细胞24 h及0.5、1μmol/L作用Raji细胞24 h后,两种细胞均明显阻滞在G0/G1期(P＜0.01);经过不同浓度YX-18处理两种细胞的周期相关蛋白Cyclin D1、Cyclin E1、CDK2、P-CDK2表达水平均下降,p21Wafl/Cipl与对照组相比,表达水平上升.以YX-18 2.0、4.0μmol/L分别作用两种细胞24 h后,线粒体膜电位下降(rCA46=-0.96,rRaji=-0.99);且DA PI染色可见经YX-18处理后的CA46细胞核固缩、裂解.YX-18 1.0、2.0、4.0μmol/L分别作用两种细胞24 h后,随着该药物作用浓度的增高,2株细胞内胞浆和胞核P65均明显降低,细胞内IκB升高,P-IκB、P-P65均明显降低,肿瘤增殖蛋白C-MYC、BCL-2表达水平明显降低.YX-18 1.0、2.0、4.0 μ mol/L分别作用两种细胞24 h,细胞内C-MYC、Ki-67基因mRNA表达水平均明显降低,Raji(EBV+)细胞EBNA-1基因mRNA表达水平也明显降低.结论:新型大黄素衍生物YX-18可以显著抑制BL细胞的增殖,同时诱导细胞凋亡并引起细胞周期阻滞.YX-18的作用可能与影响Caspase-分子和C-MYC、Ki-67等增殖凋亡相关分子,抑制NF-κB通路等有关.