Citrulline, crosstalk hépatocytes-macrophages et stéatose hépatique non alcoolique

Introduction et but de l’etude La progression de la steatose hepatique non alcoolique de la steatose vers la steato-hepatite est liee a un processus inflammatoire dans lequel le crosstalk hepatocyte-macrophage jouerait un role determinant. Dans la recherche de nouveaux traitements de cette pathologie, la citrulline (Cit) pourrait etre une alternative interessante car elle exerce a la fois des effets benefiques sur le metabolisme lipidique des hepatocytes via une diminution de la lipogenese de novo et la reduction du stress du reticulum endoplasmique (RE), et une action anti-inflammatoire sur les macrophages. Notre hypothese est que la Cit previendrait la progression de la steatose vers la steato-hepatite en agissant sur l’interaction entre hepatocytes et cellules de Kupffer. Materiel et methodes Des cocultures d’hepatocytes (H4IIE) et de macrophages (RAW 264.7, modele de cellules de Kupffer) ont ete simultanement exposees a un stress metabolique (F, 25 mM de fructose) et inflammatoire (LPS, lipopolysaccharide 50 ng/ml) en presence ou non de Cit (Cit, 2 mM) pendant 24 h. Dans un deuxieme temps, des cellules H4IIE ou Raw264,7 stressees (S) ou non (NS) par le fructose ou le LPS ont ete exposees pendant 24 h a differents milieux conditionnes respectivement de cellules Raw (C, CCit, LPS, LPSCit) ou H4IIE (C, Cit, F, FCit). Nous avons evalue le metabolisme lipidique (triglycerides (TG), lipogenese de novo (ChREB, Fas)), le stress du RE (eiF2α, Perk), le stress inflammatoire (TLR4, NFκB, iNOS, NO, TNFα). Statistique : ANOVA et test de Fisher ; significativite : p ≤ 0,05. Resultats et analyse statistique Dans les cocultures, la Cit diminue l’accumulation des TG via une diminution significative de l’expression genique de ChREBP et FAS et le stress du RE (CHOP) dans les hepatocytes ; elle reduit l’expression TLR4 dans les macrophages et diminue globalement la production de NO. Les milieux conditionnes des Raw sont sans effet sur le contenu en TG et le stress cellulaire des H4IIE avec une activation d’eiF2α significativement plus elevee dans tous les groupes par rapport aux controles. L’activation de Perk est significativement plus elevee en presence des milieux LPS et LPSCit. Dans les macrophages, le stress diminue significativement le contenu en proteines et augmente significativement la production de TNFα et de NO, et l’expression genique de iNOS independamment du milieu conditionne H4IIE. Le contenu proteique est toutefois significativement plus eleve en presence de milieux C et FCit et la production de NO significativement plus elevee en presence de milieu F. Nous n’avons ni un effet stress ni un effet des milieux conditionnes H4IIE sur l’expression de NFκB. Conclusion La Cit a un effet benefique sur le crosstalk macrophages/hepatocytes en agissant sur le statut inflammatoire des macrophages, ce qui contribuerait a la diminution observee du stress du reticulum et de l’accumulation des lipides au niveau des hepatocytes. Le stress du RE dans les hepatocytes pourrait etre induit par des mediateurs (cytokines ?) provenant des macrophages. La voie du NO dans les macrophages semble etre principalement induite par le LPS mais pas par les hepatocytes.