基于PARMS技术的结核分枝杆菌利福平耐药基因rpoB分子标记的开发

文中旨在建立结核分枝杆菌利福平耐药基因rpoB的荧光分子标记,为分子药物敏感性试验提供简便、可靠的基因分型检测方法.对比分析利福平耐药菌株rpoB基因531、526、516、511、513等氨基酸位点的基因突变与敏感菌株中等位基因的序列差异,结合PARMS技术(Penta-primer amplification refractory mutation system),建立rpoB基因的荧光分子标记.利用其对104例结核分枝杆菌临床分离株进行检测,经Sanger测序验证,正确率100％.并采用比例法药敏试验对这104份样本进行了利福平耐药性鉴定,与分子标记结果相符率为94.23％.结果表明,分子标记有较强可靠性,能检出表型药敏无法测出的低浓度耐药样本(511/533单位点突变).建立的11组荧光分子标记能覆盖92％-96％的利福平耐药菌株rpoB基因突变类型,为快速检测结核分枝杆菌利福平耐药提供新思路.