异土木香内酯诱导慢性粒细胞白血病细胞BCR-ABL融合蛋白降解

目的·探索异土木香内酯(isoalantolactone,Iso)对伊马替尼敏感和耐药的慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)细胞的效应,以及下调BCR-ABL融合蛋白的分子机制.方法·采用不同浓度的Iso分别处理K562和K562R细胞0、24、36、48h后,用CCK-8法测定Iso对CML细胞的抑制效应.用流式细胞术检测Iso诱导K562和K562R细胞24 h的凋亡效应.蛋白质印迹法(Western blotting)检测不同浓度、不同作用时间下Iso对CML细胞中BCR-ABL融合蛋白水平的影响.采用反转录及实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测Iso对CML细胞中BCR-ABL mRNA水平的影响.分别用蛋白酶体抑制剂MG132、自嗤抑制剂3-甲基腺嘌呤和溶酶体抑制剂氯喹联合Iso处理K562细胞,用半胱天冬酶抑制剂Z-VAD-FMK联合Iso处理K562与K562R细胞,并采用Western blotting检测BCR-ABL融合蛋白水平的改变.在K562R细胞中敲减半胱天冬酶3(caspase3,CASP3)、半胱天冬酶7(caspase7,CASP7),检测其对由Iso诱导BCR-ABL融合蛋白下调的影响.结果·Iso抑制CML细胞的增殖,且呈剂量和时间依赖性.流式细胞术结果显示Iso可增加K562与K562R细胞凋亡的发生(均P＜0.05).Western blotting结果显示Iso能诱导BCR-ABL融合蛋白水平降低,而qPCR结果显示BCR-ABLmRNA水平无显著变化.MG132、3-甲基腺嘌呤以及氯喹不能逆转由Iso诱导的BCR-ABL融合蛋白的下调,而Z-VAD-FMK可部分逆转该下调.敲减CASP3后能部分逆转由Iso诱导的BCR-ABL蛋白的降解,而CASP7敲减后则无影响.结论·Iso可靶向降解BCR-ABL融合蛋白.该结果为克服CML细胞的耐药提供了实验基础.