miR-1914-3p介导ARL4C抑制肾癌细胞侵袭和增殖的分子机制

目的:探究微小RNA(miR)-1914-3p调控ARL4C表达影响肾癌细胞侵袭和增殖能力的分子机制。方法:利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测53例肾癌患者肿瘤组织及癌旁组织、4种肾癌细胞系(ACHN、OS-RC-2、786-O、A498)和正常近端肾小管上皮细胞系(HK-2)中miR-1914-3p的表达水平。利用脂质体法将无意义序列(NC)和miR-1914-3p mimic分别瞬时转染至miR-1914-3p表达最低的肾癌细胞中，即NC组和miR-1914-3p组。qRT-PCR法检测转染细胞中miR-1914-3p的表达水平。Transwell侵袭实验和细胞计数试剂盒(CCK-8)检测各组细胞的侵袭和增殖能力。生物信息学软件和双荧光素酶基因报告实验分别预测和检验miR-1914-3p对靶基因的靶向调控机制。qRT-PCR和Western blot分别检测各组细胞中靶基因的表达水平。结果:肾癌组织miR-1914-3p表达低于相应癌旁组织( P<0.01)。肾癌细胞系miR-1914-3p表达低于HK-2细胞( P<0.01)，OS-RC-2细胞中miR-1914-3p的表达最低( P<0.01)。NC组和miR-1914-3p组miR-1914-3p的表达分别为(1.04±0.17)和(11.40±0.91)，miR-1914-3p组中miR-1914-3p表达水平显著升高( P<0.01)，表明转染成功。过表达miR-1914-3p能明显抑制OS-RC-2细胞的侵袭( P<0.01)和增殖能力( P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证明，miR-1914-3p的靶基因可能是ADP-核糖基化样因子4C(ARL4C)，miR-1914-3p能明显抑制野生型ARL4C-3′UTR的荧光素酶活性( P<0.01)。过表达miR-1914-3p可降低OS-RC-2细胞中ARL4C mRNA和蛋白的表达( P<0.01)，降低细胞侵袭表型蛋白(Snail、Slug)及细胞增殖表型蛋白(Mcm2、Mcm7)表达。 结论:miR-1914-3p在肾癌中低表达，其通过靶向干扰癌基因ARL4C的表达抑制肾癌细胞的侵袭和增殖，参与肾癌的发生、发展。