靶向沉默ATRX对辐射诱导宫颈癌HeLa细胞周期阻滞和凋亡的作用

目的:靶向沉默HeLa细胞中α-地中海贫血/精神发育迟滞综合征X染色相关蛋白(ATRX),探讨其对辐射诱导的细胞周期阻滞和细胞凋亡的作用.方法:利用RNA干扰(RNAi)技术建立稳定沉默ATRX的HeLa细胞模型,命名为shATRX1-HeLa,以shCon-HeLa为阴性对照.分别给予0、2和8 Gy X射线照射后,采用CCK-8法检测各组细胞增殖活性,采用PI单染和流式细胞术检测各组细胞中G0/G1、S和G2/M期细胞百分率,采用AnnexinⅤ-PE/7-AAD双染和流式细胞术检测各组细胞凋亡率,采用Western blotting法检测各组细胞中多聚(腺苷酸二磷酸核糖基)聚合酶1(PARP1)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(cleaved caspase-9)和裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved caspase-3)蛋白表达情况.结果:0、2和8 Gy X射线照射后0、6、10、24和48 h,与shCon-HeLa组比较,不同照射剂量shATRX1-HeLa组细胞增殖活性均明显降低(P<0.05或P<0.01).0和2 Gy X射线照射后,与shCon-HeLa组比较,shATRX1-HeLa组G0/G1期细胞百分率明显降低(P<0.05),G2/M期细胞百分率和细胞凋亡率则明显升高(P<0.05);8 Gy X射线照射后,与shCon-HeLa组比较,shATRX1-HeLa组G0/G1期细胞百分率明显升高(P<0.05),而G2/M期细胞百分率明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.01).Western blotting法检测,与shCon-HeLa组比较,经2和8 Gy照射后24和48 h,shATRX1-HeLa组细胞中PARP1、cleaved caspase-9和cleaved caspase-3蛋白表达均明显增加.结论:靶向沉默HeLa细胞ATRX可降低辐射诱导的细胞G2/M期阻滞、抑制细胞增殖并促进细胞凋亡,本研究结果为肿瘤放疗提供了新的分子靶点.