miR-762通过靶向调控NCOR1表达对人舌鳞状细胞癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨miR-762与核受体辅助抑制因子1(NCOR1)的靶向关系及其对人舌鳞状细胞癌(TSCC)细胞增殖和凋亡的影响,为TSCC临床诊断和治疗提供新的分子标志物和靶点.方法:采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测48例TSCC患者癌组织及其癌旁正常组织中miR-762和NCOR1 mRNA表达水平,并通过Pearson相关分析法分析两者表达的相关性.采用RT-qPCR法和Western blotting法检测人正常舌上皮细胞Hacat及人TSCC细胞(Tca-8113、CAL-27、SCC-15和SCC-9)中miR-762和NCOR1 mRNA及蛋白表达水平.将miR-762 inhibitor或si-NCOR1分别或同时转染至CAL-27细胞中,实验分为空白对照组、inhibitor-NC组、miR-762 inhibitor组、si-NC组、si-NCOR1组和miR-762 inhibitor+si-NCOR1组,采用RT-qPCR法检测CAL-27细胞中miR-762和NCOR1 mRNA表达水平,MTT法检测各组细胞增殖活性,EdU法检测各组EdU染色阳性细胞率,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中NCOR1、活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved-Caspase-3)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平,荧光素酶报告实验验证miR-762与NCOR1的靶向调控关系.结果:与癌旁正常组织和正常上皮细胞Hacat比较,TSCC组织和TSCC细胞中miR-762表达水平明显升高(P<0.01),而NCOR1 mRNA表达水平明显降低(P<0.01),且在TSCC组织中miR-762与NCOR1 mRNA表达水平呈负相关关系(r=-0.711,P=0.003).荧光素酶报告实验证实NCOR1是miR-762的靶基因.与空白对照组和inhibitor-NC组比较,miR-762 inhibitor组细胞增殖活性、EdU阳性细胞率和细胞中Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.01),细胞凋亡率和细胞中cleaved-Caspase-3及Bax蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与miR-762 inhibitor组比较,miR-762 inhibitor+si-NCOR1组细胞增殖活性、EdU阳性细胞率和细胞中Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P<0.01),细胞凋亡率和细胞中cleaved-Caspase-3及Bax蛋白表达水平明显降低(P<0.01).结论:抑制miR-762表达能通过靶向上调NCOR1表达抑制TSCC细胞的增殖,并促进细胞凋亡.