微小RNA-362通过调控组蛋白去乙酰化酶6抑制大鼠骨癌痛

目的 探讨骨癌痛(BCP)大鼠模型中微小RNA(miR)-362和组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)的表达变化,以及上调miR-362产生的镇痛效应和潜在作用机制.方法 大鼠骨髓腔内注射Walker 256乳腺癌细胞建立BCP模型.用质粒转染方法调控miR-362和HDAC6表达,用Van Frey纤维丝和热痛刺激仪检测大鼠机械缩足阈值(PWT)和热缩组潜伏期(PWL)变化,用qRT-PCR检测脊髓miR-362和HDAC6 mRNA表达,Western blotting检测HDAC6和核因子κB p65(NF-κB p65)蛋白表达,用ELISA检测炎性因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)蛋白水平,最后用荧光素酶活性实验明确miR-362与HDAC6的上下游关系.结果 与sham组相比,BCP组大鼠PWT和PWL显著下降,脊髓miR-362表达显著减少,HDAC6 mRNA和蛋白显著增加(均P<0.05).与BCP组相比,BCP+LV-miR-362组大鼠出现PWT和PWL显著上升,脊髓HDAC6 mRNA和蛋白显著减少(均P<0.05).与BCP+LV-miR-362组比较,BCP+LV-miR-362+LV-HDAC6组大鼠PWT和PWL显著下降(均P<0.05).此外,与BCP组相比,BCP+LV-HDAC6 siRNA组大鼠脊髓NF-κB p65、IL-1β、IL-6和TNF-α蛋白显著减少(均P<0.05).最后,与mimic miR-362+HDAC63'UTRMUT组相比,mimic miR-362+HDAC63'UTRWT组荧光素酶活性明显降低(P<0.05).结论 在大鼠BCP模型中,miR-362可通过"HDAC6-NF-κB p65"通路抑制BCP,提示miR-362有可能成为BCP分子治疗的新靶点.