wnt经典信号通路在酸性pH抑制成骨细胞功能中的作用

目的:探讨wnt经典通路在酸性pH抑制成骨细胞功能中的作用.方法:胶原酶消法提取新生Sprague-Dawley(SD)大鼠颅骨原代成骨细胞,碱性磷酸酶(ALP)和茜素红(ARS)染色鉴定.传代培养至第3代,分别用pH6.0、pH6.4、pH6.8、pH7.4(对照)的DMEM高糖培养基进行培养.CCK8法检测各组细胞增殖情况;Live/Dead染色观察凋亡情况;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组细胞 COL1A1、β-catenin、RUNX2、wnt3a 的 mRNA 表达水平;Western 印迹法分析各组细胞 COL1A1、β-catenin、RUNX2、wnt3a蛋白的表达情况.结果:ALP和ARS染色结果均为阳性,证明提取的原代细胞为成骨细胞.CCK8结果显示随着pH值降低和时间延长,pH6.0、pH6.4、pH6.8组实验各组细胞增殖活力均有下降(F=42.800、93.700,均P＜0.05).Live/Dead染色结果显示,随着pH值降低,细胞凋亡百分比显著增加(F=63.74,均P＜0.05).RT-PCR结果显示,与对照组相比,pH6.0、pH6.4、pH6.8组 mRNA 的表达显著降低(F=20.32、17.76、7.809、11.16,均 P＜0.05).Western 印迹结果显示,与对照组相比,pH6.0、pH6.4、pH6.8组蛋白表达水平均显著下降(F=20.02、15.67、22.11、42.11,均P＜0.05).结论:酸性pH可影响成骨细胞的增殖、凋亡和分化,其机制可能与wnt经典信号通路有关.