腺病毒介导的shRNA下调GLP-1R表达对小鼠内皮祖细胞功能的影响及机制研究

目的 探讨腺病毒介导的shRNA下调胰高血糖素样肽-1受体(GLP-1R)基因表达对小鼠骨髓来源的内皮祖细胞(EPCs)迁移、黏附、衰老的影响及其可能机制.方法 采用密度梯度离心法分离并培养小鼠骨髓EPCs,以腺病毒为载体将靶向GLP-1R的shRNA干扰重组体转染至体外培养的EPCs;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)及免疫印迹法(Western Blot)验证GLP-1R基因表达下调.利用Transwell小室检测EPCs迁移能力,黏附实验检测其黏附能力,β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老,Western Blot检测AKT/eNOS信号通路变化情况.实验分为正常组(在腺病毒转染步骤以EGM-2代替腺病毒液)、对照组(转染表达绿色荧光蛋白的空病毒)和转染组(转染靶向GLP-1R并表达绿色荧光蛋白的RNA干扰重组腺病毒).结果 靶向GLP-1R的shRNA成功转染体外EPCs并下调GLP-1R mRNA及蛋白表达(P<0.01);功能实验显示,与对照组比较,转染组EPCs迁移能力明显降低(P<0.01),黏附能力受损(P<0.01),细胞衰老增加(P<0.01);信号通路显示AKT/eNOS磷酸化水平明显降低(P<0.01).结论 GLP-1R基因表达下调能显著抑制小鼠EPCs迁移及黏附能力,并诱导细胞衰老,其机制可能与调控AKT/eNOS信号通路有关.