小分子药物Tideglusib促进大鼠创面愈合的机制研究

目的 研究小分子药物Tideglusib对大鼠创面愈合的影响及其机制.方法 选择40只健康雄性2月龄SD大鼠,采用随机数字表法随机分为对照组和Tideglusib组,每组20只,在其背部制作直径8 mm的圆形全层皮肤缺损创面,伤后即刻起,对照组创面滴加50 μL磷酸盐缓冲溶液(PBS),Tideglusib组创面滴加50 μL 40 μmol/L的Tideglusib,1次/d.(1)每组按照随机数字表法选定8只大鼠,分别于伤后3、7、10 d观察创面愈合情况,并计算、比较创面愈合率.(2)每组从未进行创面观察的12只大鼠中选定6只,分别于伤后3、7、10d取创缘组织,通过苏木精-伊红染色观察创面愈合过程中再上皮化情况、新生毛细血管情况、新生表皮厚度,Masson染色观察真皮胶原纤维排列情况,免疫组织化学染色检测驱动蛋白家族成员14 (KIF14)表达水平和分布.(3)将每组剩余的6只大鼠在伤后3d取创缘组织,经蛋白质印迹法检测蛋白激酶(PKB)、磷酸化蛋白激酶B(p-PKB)、KIF14表达水平变化.对数据行独立样本t检验.结果 (1)相较于对照组,Tideglusib组在各时相点创面明显缩小,创面渗出物更少,炎症反应更轻,肉芽组织质量更好,新生表皮延伸更多;伤后3d,Tideglusib组创面愈合率为(12.42±3.48)％,对照组创面愈合率为(8.35±1.73)％,2组比较差异无统计学意义(t=1.48,P=0.56);伤后7、10 d,Tideglusib组创面愈合率分别为(33.69±2.18)％、(73.69±3.23)％,与对照组[(21.44±2.11)％、(56.12±3.65)％],比较,差异均有统计学意义(t=5.71、5.08,P=0.01、0.02).(2)相较于对照组,Tideglusib组在各时相点创面新生表皮层次更多,同真皮连接更加完善,钉突数量更多,且厚度均厚于对照组;伤后3、7、10 d,Tideglusib组新生表皮厚度分别为(15.86±1.78)、(40.42±4.07)、(60.39±7.68) μm,厚于对照组[(6.07±1.12)、(22.25±3.24)、(36.36±6.46)μm],2组比较差异均有统计学意义(t=6.58、4.94、5.36,P =0.003、0.008、＜0.05).相较于对照组,Tideglusib组在各时相点真皮形态更接近于正常大鼠皮肤,胶原更加粗大,排列更加有序,胶原纤维含量更高;伤后3、7、10 d,Tideglusib组真皮胶原纤维含量分别为(16.33±2.35)％、(37.61±3.88)％、(49.72±1.98)％,高于对照组[(7.53±2.99)％、(16.97±3.55)％、(27.06±3.81)％],2组比较差异均有统计学意义(t=3.27、5.55、7.47,P=0.03、0.01、＜0.05).伤后3d,对照组和Tideglusib组KIF14均主要表达在创缘的表皮和毛囊处;伤后7、10 d,Tideglusib组可在表皮层观察到大量棕黄色KIF14阳性表达,真皮层内也可见棕黄色颗粒分布,而对照组棕黄色颗粒分布稀疏且仅局限于表皮层;伤后3d,Tideglusib组KIF14免疫组织化学染色平均吸光度值同对照组比较,差异无统计学意义(t=0.994,P=0.344);伤后7、10 d,Tideglusib组KIF14平均吸光度值高于对照组,差异均有统计学意义(t=3.440、2.826,P=0.006、0.018).(3)伤后3d,Tideglusib组PKB蛋白相对表达量相较于对照组,差异无统计学意义(P＞0.05),p-PKB、KIF14蛋白相对表达量相较于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 小分子药物Tideglusib可加速SD大鼠创面愈合,其机制可能与上调PI3K/PKB/KIF14信号通路有关.