克里米亚刚果出血热病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

目的 原核表达并纯化克里米亚-刚果出血热病毒(Crimean-Congo hemorrhagic fever virus,CCHFV)M基因编码的包膜糖蛋白片段Gn1和Gc1,以两段目的蛋白为包被抗原分别建立检测CCHFV抗体的间接ELISA方法.方法 PCR扩增CCHFV M基因的抗原保守区胞外域Gn1和Gc1基因片段,分别克隆至pET-30a(+)载体,转化大肠埃希菌BL21 (DE3),并对不同诱导条件(温度、IPTG浓度、时间)进行优化,使用His-Ni柱纯化目的蛋白,进行SDS-PAGE和Western blot鉴定,分别以纯化的Gn1和Gc1蛋白作为包被抗原建立抗体ELISA检测方法.结果 表达并纯化了CCHFV糖蛋白片段Gn1、Gc1,分子质量分别为35 ku和23 ku;Western blot检测两种重组蛋白均能被抗Gn1,Gc1抗体识别.以纯化蛋白为抗原建立的间接ELISA方法检测已知阳性血清CCHFV抗体滴度为1∶10240,检测RVFV、WNV、JEV感染者血清均阴性,变异系数＜8％.结论 表达纯化的Gn1和Gc1蛋白纯度均在90％以上,两种蛋白均表现出良好的免疫原性,以两种蛋白为包被抗原建立的抗体间接ELISA检测方法,该方法具有良好的特异性和敏感性.重组蛋白的制备为克里米亚刚果出血热疫苗免疫效果评价、疫病监测和新型疫苗研发奠定了基础.