预知子醇提物联合雷公藤红素 对SMMC7721细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察预知子醇提物联合雷公藤红素对SMMC7721细胞增殖和凋亡的影响,探讨其可能的作用机制.方法 将不同浓度预知子醇提物和雷公藤红素分别作用于SMMC7721细胞72 h,MTT法获得细胞存活率、72 h IC50后,计算药物相互作用指数(CDI).将SMMC7721细胞分为空白对照组、预知子醇提物组、雷公藤红素组和预知子醇提物+雷公藤红素组(联合组),光镜观察细胞形态,荧光显微镜观察细胞核形态,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测线粒体凋亡途径、内质网应激途径、自噬相关和线粒体-内质网结构偶联(MAM)相关蛋白的表达.结果 预知子醇提物和雷公藤红素72 h IC50剂量CDI值为0.45,存在显著协同效应.联合组细胞存活率明显降低(P<0.05),细胞形态发生改变,且部分细胞核呈碎块状,细胞凋亡率较其余3组显著升高(P<0.05).与空白对照组比较,雷公藤红素组和联合组线粒体凋亡相关蛋白Caspase-3表达明显降低(P<0.05),联合组cleaved Caspase-3表达明显降低(P<0.05),预知子醇提物组内质网应激相关蛋白Grp78表达明显降低(P<0.05),雷公藤红素组和联合组Grp78蛋白表达明显升高(P<0.05);联合组Chop蛋白表达较其余3组均明显升高(P<0.05);与空白对照组比较,预知子醇提物组和联合组自噬相关蛋白p62、LC3BⅡ及LC3BⅡ/Ⅰ比值均显著升高(P<0.05),各给药组MAM标志物Mfn2表达均升高但差异无统计学意义(P>0.05).结论 预知子醇提物联合雷公藤红素可抑制SMMC7721细胞增殖、诱导细胞凋亡,预知子醇提物和雷公藤红素作用靶点不尽相同;二者的一致性效应机制方面,除Caspase-3和cleaved Caspase-3、Chop和Mfn2等分子外,尚需进一步扩大关注面.