基于游离质粒的木糖诱导型枯草芽孢杆菌转化体系的建立及其应用

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)作为食品级安全菌株,因其具有理化特征清晰、培养发酵方便等特点,广泛应用于异源蛋白质的高效表达以及高附加值物质的合成.传统的B.subtilis遗传转化方法存在操作流程繁琐、效率低等缺点,因此,开发方便高效的遗传转化系统具有重要意义.转录因子ComK被证实能调控B.subtilis感受态的形成,并在B.subtilis高效转化中有重要作用.构建1个含有木糖诱导启动子Pxyl调控comK表达的穿梭质粒pUBC01-Pxyl?comK的菌株B.subtilis K1,经木糖诱导条件优化后,质粒pHY300-p43-egfp的转化效率达到4.8×103 CFU· μg-1.此外,质粒pUBC01-Pxyl?comK可在无胁迫条件下连续培养及消除.木糖诱导感受态体系及质粒消除极大地提高了芽孢杆菌基因编辑和菌株改造的便捷性,同时增强了菌株尤其是生产菌株的性状稳定性.