应用MALDI-TOF-MS筛选紫杉醇耐药乳腺癌组织蛋白标志物

目的:应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)系统分析紫杉醇耐药MMTV-PyMT乳腺癌小鼠组织蛋白差异谱,筛选具有潜在诊断意义的组织蛋白标志物.方法:取8只雌性MMTV-PyMT转基因小鼠,10周龄时给予紫杉醇(10 mg/kg)治疗,每周给药2次,给药4周后处死.测量肿瘤体积,分别取肿瘤体积较小和较大的4只小鼠作为紫杉醇药物敏感组和非敏感组(耐药组).采用免疫组织化学法(IHC)检测两组肿瘤组织增殖相关因子表达情况,细胞凋亡检测法(TUNEL)检测两组肿瘤中细胞凋亡情况,苏木精-伊红(HE)染色法观察两组肿瘤组织细胞损伤程度,蛋白质印迹法(Western blot)检测两组肿瘤组织凋亡相关蛋白的表达.采用MALDI-TOF-MS系统对两组组织中的蛋白或多肽表达谱进行检测,运用Clin-ProTools分析软件进行分析,筛选出12个差异分子峰,建立诊断预测模型.结果:相对于紫杉醇敏感乳腺癌组织,紫杉醇耐药组乳腺癌组织细胞增殖数目明显增加,细胞凋亡明显减少.耐药组凋亡蛋白BAX和Cleaved Caspase-3表达明显减少,肿瘤细胞无明显损伤.紫杉醇敏感与耐药乳腺癌组织,共筛选出12个差异明显的分子峰值,其中耐药组有9个上调,有3个下调,筛选出5个差异最大的分子峰建立紫杉醇耐药预测模型.结论:应用MALDI-TOF-MS系统可检测乳腺癌紫杉醇敏感组与耐药组肿瘤组织蛋白差异,筛选的差异组织蛋白可能成为诊断紫杉醇耐药乳腺癌的分子标志物.