无子瓯柑E3泛素连接酶基因CsRNF217的克隆与功能分析

[目的]无子瓯柑是其野生型的雄性不育突变体.基于转录组-代谢组关联分析,克隆无子瓯柑E3泛素连接酶基因CsRNF217,分析其序列特征、表达模式、亚细胞定位及基因功能.[方法]采用生物信息学方法分析无子瓯柑Cs-RNF217基因序列特征;利用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)分析时空表达模式;根据转基因烟草表型特征分析基因功能,采用烟草瞬时表达分析其亚细胞定位.[结果]无子瓯柑CsRNFF217基因cDNA全长768 bp,编码255个氨基酸,具有RING型E3家族典型结构域.qRT-PCR结果显示,无子瓯柑CsRNF217基因在雄蕊中表达量最高,在小孢子发育后期上调表达.过表达转基因烟草的种子数量和花粉活力显著下降.烟草叶片瞬时表达的荧光信号特异位于细胞核.[结论]无子瓯柑CsRNF217基因编码RING型E3,定位于细胞核,在雄蕊中表达量最高,在花粉发育晚期上调表达,推测对无子瓯柑和过表达转基因烟草的花粉发育过程可能起到负向调控作用.