小反刍兽疫病毒C蛋白在外周血单个核细胞中的过表达及鉴定

为探索小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)非结构蛋白C(PPRV-C)的功能及其调节宿主细胞免疫抑制的分子机制,首先根据GenBank中PPRV-C蛋白基因序设计引物,通过PCR扩增获得PPRV-C蛋白基因,将其克隆至慢病毒载体PLVX-IRES-puro上,并命名为PLVX-IRES-puro-PPRV-C,随后连同辅助质粒共同转染HEK-293T细胞,收集上清,浓缩后测定重组慢病毒效价.用包装好的重组慢病毒感染绵羊外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)12 h后,换维持液继续培养,一定时间后收集细胞,检测PPRV-C的mRNA和蛋白表达水平;同时用空载体慢病毒做空白对照.结果显示:成功地构建了 PPRV-C蛋白过表达重组慢病毒载体,包装的重组慢病毒效价为(9.6±8.8)×107TU/mL.重组慢病毒感染(MOI=10)后,检测到PPRV-C蛋白mRNA的转录和蛋白的表达结果表明,构建的PPRV-C慢病毒能在PBMCs中高效表达,同时也为今后进一步研究PPRV-C蛋白的功能奠定了基础.