增食欲素A诱导的自噬在人结肠癌细胞HT-29凋亡中的保护作用

目的 研究增食欲素A(Orexin A)诱导的人结肠癌细胞HT-29自噬性活化,探讨自噬与凋亡的关系.方法 用Orexin A处理培养的HT-29细胞,通过透射电子显微镜观察细胞内自噬体的形成情况.用不同浓度Orexin A处理HT-29细胞,通过Western blotting测定自噬相关蛋白Beclin-1和LC3的表达水平.用氯喹(CQ)和Orexin A共同处理细胞,通过MTT法检测对细胞活力的影响,用流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,Western blotting检测caspase-3的裂解.结果 Orexin A处理后,HT-29细胞活力降低,凋亡率升高,电镜下可见细胞内自噬体形成,Beclin-1和LC3蛋白的表达水平均升高.与单独Orexin A作用相比,CQ诱导细胞的凋亡率增加,增殖抑制率降低,Orexin A可裂解前caspase-3至其活性形式.结论 Orexin A能够诱导HT-29细胞发生自噬性活化,延缓凋亡的发生.