circLARP4对宫颈癌细胞中PTBP1/Wnt/β-catenin通路的影响

目的 探讨circLARP4在宫颈癌中的作用及其对PTBP1/Wnt/β-catenin通路的调控作用.方法 采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测circLARP4在正常宫颈细胞Ect1/E6E7和宫颈癌细胞(SiHa、HeLa、CaSki、MS751、ME180和C33A)中的表达水平.将SiHa细胞随机分成control组、pcDNA-NC组、pcDNA-circLARP4组、pcDNA-cir-cLARP4+pcDNA-NC组以及pcDNA-circLARP4+pcDNA-PTBP1组,通过qRT-PCR检测circLARP4的表达;细胞计数试剂(CCK-8)和克隆形成实验检测细胞增殖能力;划痕实验检测细胞迁移能力;RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)验证circLARP4与PTBP1之间的结合关系;蛋白质印迹法检测蛋白表达.结果 相比较正常宫颈细胞Ect1/E6E7(1.00±0.10),circLARP4在宫颈癌细胞SiHa(0.30±0.05)、HeLa(0.50±0.09)、CaSki(0.36±0.09)、MS751(0.50±0.05)、ME180(0.60±0.03)和C33A(0.35±0.07)中低表达,差异有统计学意义,F=32.7,P<0.001.CCK-8实验和克隆形成实验结果显示,pcDNA-circLARP4组(0.82±0.07,217.00±25.00)细胞增殖能力,相较pcDNA-NC组(1.18±0.08,326.00±30.00)和control组(1.23±0.09,315.00±28.00)降低,差异均有统计学意义,F值分别为61.9和14.3,P值分别为<0.001和0.008.划痕实验结果显示,pcDNA-circLARP4组(64.00±8.00)细胞相对迁移率相较pcDNA-NC组(100.00±9.00)降低,t=5.3,P=0.006.蛋白质印迹法结果显示,pcDNA-circLARP4组MMP-2(t=8.3,P<0.001)和MMP-9(t=6.0,P=0.004)表达相较pcDNA-NC组均降低;Snail(F=79.9,P<0.001)、ZEB1(F=79.3,P<0.001)、N-cad(F=14.7,P=0.008)和Vimentin(F=31.4,P=0.003)表达相较pcDNA-NC组和control组均降低,E-cadherin表达升高,F=61.8,P<0.001.RIP实验结果显示,相较IgG抗体(1.00±0.23),circLARP4主要富集在PTBP1(21.37±1.48)抗体上,F=42.0,P<0.001.相较pcDNA-circLARP4+pcDNA-NC组,同时过表达PTBP1后,β-actin(F=17.2,P=0.038)、c-Myc(F=42.5,P<0.001)和Cyclin D1(F=52.7,P<0.001)的表达均升高.结论 circLARP4靶向负调控PTBP1表达,抑制Wnt/β-catenin通路,进而抑制SiHa细胞的增殖、侵袭及迁移.