人卵巢壁层颗粒细胞和卵丘细胞体外分离及原代培养的比较

目的:为建立合适卵巢功能研究的细胞模型,本研究比较了人卵巢壁层颗粒细胞(mural granulosa cells,MGCs)与卵丘细胞(cumulus cells,CCs)体外分离及原代培养的效果.方法:收集16例行辅助生殖技术治疗患者取卵日的卵泡液及其卵丘-卵母细胞复合物(223个),采用密度梯度离心法分离MGCs,机械切割法+酶解法分离CCs.应用台盼蓝染色法比较CCs与MGCs的细胞总数和存活率,通过流式细胞术检测卵泡刺激素受体(follicle stimulating hormone receptor,FSHR)的表达来鉴定CCs与MGCs的细胞纯度,qPCR和Western blot方法检测微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)、P62和Bax mRNA和蛋白的表达水平.结果:与MGCs相比,CCs的分离耗时少,细胞存活率高(P<0.05),体外培养的细胞延展性好;流式细胞术显示分离后的CCs与MGCs的FSHR表达量分别为(92.23±2.66)％和(81.33±6.57)％,差异具有显著性(P<0.05);CCs中LC3的mRNA表达水平显著低于MGCs(P<0.01),Bax的mRNA表达水平显著高于MGCs(P<0.05),CCs与MGCs的P62 mRNA表达水平没有显著差异(P>0.05),LC3、P62和Bax蛋白在CCs与MGCs中的表达差异与mRNA一致.结论:机械切割法+酶解法分离CCs方法简便,收集细胞的纯度高,细胞状态良好,可作为卵巢功能研究的细胞模型.