免疫分子B7-H3对骨关节炎成纤维样滑膜细胞生物学功能的影响

目的:探讨免疫分子B7-H3对OA成纤维样滑膜细胞（FLS）生物学功能的影响。方法:获取OA膝关节滑膜组织5例和正常膝关节滑膜组织4例，并分离、培养原代细胞株。以OA滑膜组织和原代OA-FLS为研究对象，利用免疫组织化学染色、realtime-PCR、流式细胞术研究OA滑膜组织B7-H3表达情况。根据B7-H3 996及1041位点设计相应siRNA沉默并下调OA-FLS中B7-H3的表达，通过蛋白质印迹法、流式细胞术测定靶细胞B7-H3蛋白抑制情况，划痕实验、Transwell实验分析其迁移、侵袭能力，CCK-8法检测细胞增殖能力，CBA法检测细胞培养上清细胞因子及趋化因子表达。使用GraphPad Prism 8.0软件分析实验数据，正态分布数据用 ± s表示，数据间两两比较采用 t检验，以 P<0.05为差异有统计学意义。 结果:B7-H3分子在OA膝关节滑膜组织中FLS异常高表达。相比于siNC，si996、si1041可以抑制OA-FLS中B7-H3的表达。在Transwell迁移实验中，OA-FLS迁移能力下降[siNC组和si996组（100.3±3.7）个/视野和（48.7±1.2）个/视野， t=13.24， P<0.001；siNC组和si1041组（100.3±3.7）个/视野和（59.7±1.9）个/视野， t=9.80， P<0.001]。在Transwell侵袭实验中，表明侵袭能力下降[siNC组和si996组（127.3±5.6）个/视野和（39.7±3.3）个/视野， t=13.49， P<0.001；siNC组和si1041组（127.3±5.6）个/视野和（57.3±1.9）个/视野， t=11.85， P<0.001]。沉默B7-H3基因可以抑制OA-FLS细胞因子IL-6[siNC组和si996组（248±21） pg/ml和（111±12） pg/ml， t=24.08， P=0.002；siNC组和si1041组（248±21） pg/ml和（46±5） pg/ml， t=13.21， P=0.006]、IL-8 [siNC组和si996组（118.1±15.6） pg/ml和（47.1±5.4） pg/ml， t=6.68， P=0.022；siNC组和si1041组（118.1±15.6） pg/ml和（10.0±1.3） pg/ml， t=13.08， P=0.006]和趋化因子CXCL8[siNC组和si996组（178.8±6.4） ng/ml和（83.2±2.7） ng/ml， t=13.77， P=0.005；siNC组和si1041组（178.8±6.4） ng/ml和（93.5±2.8） ng/ml， t=12.23， P=0.007]，CCL2[siNC组和si996组（184.1±5.1） ng/ml和（109.4±5.9） ng/ml， t=9.57， P=0.011；siNC组和si1041组（184.1±5.1） ng/ml和（97.1±1.5） ng/ml， t=16.39， P=0.004]的分泌。 结论:B7-H3可能对OA-FLS的迁移、侵袭及细胞因子分泌等生物学功能有一定的调控作用，为进一步研究B7-H3参与OA发病机制提供了线索。