IKKβ缺失和NF-κB p65缺失对小鼠成骨细胞分化的影响

目的:探讨IKKβ和NF-κB p65缺失对小鼠成骨细胞分化的影响.方法:使用CRISPR/Cas9基因编辑工具分别敲除小鼠前成骨细胞MC3T3-E1中的Ikbkb或Rela基因,获得不表达IKKβ或NF-κB p65蛋白的Ikbkb-/-MC3T3-E1 和 Rela-/-MC3T3-E1 细胞.用 10 mmol/L β-甘油磷酸+50 mg/L 抗坏血酸诱导 MC3T3-E1、Ikbkb-/-MC3T3-E1、Rela-/-MC3T3-E1细胞成骨分化.诱导培养4 d后,qPCR法检测细胞中成骨分化标志性基因Sp7、A1-pl、Spp1、Bglap mRNA的表达,Western blot法检测细胞中成骨分化相关蛋白ALPL、FZD9的表达;16 d后,茜素红染色法检测细胞外基质矿化水平.结果:诱导培养后Ikbkb-/-MC3T3-E1细胞中Sp7、Alpl、Bglap mRNA表达以及ALPL、FZD9蛋白表达高于 MC3T3-E1 细胞和 Rela-/-MC3T3-E1 细胞(P＜0.010);Ikbkb-/-MC3T3-E1 细胞外基质矿化水平高于 MC3T3-E1 和 Rela-/-MC3T3-E1 细胞(P＜0.010),而 Rela-/-MC3T3-E1 与 MC3T3-E1 细胞比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:IKKβ缺失与NF-κB p65缺失在成骨细胞分化过程中的功能可能不同,IKKβ缺失促进成骨细胞分化,而NF-κB p65缺失则无此作用.