靶向催乳素受体的嵌合抗原受体T细胞制备条件的优化

嵌合抗原受体(CAR)修饰的T细胞疗法已成为恶性肿瘤治疗领域内的研究重点,催乳素受体(PRLR)也被证明其过表达会影响乳腺癌的发生与发展,是乳腺癌治疗的潜在靶点.本研究建立了三质粒系统[pHIV-绿色荧光蛋白(GFP)、psPAX2、pVSVG]包装慢病毒,并将其应用于新构建的靶向PRLR的CAR慢病毒表达载体,通过进一步优化慢病毒制备条件,测定慢病毒滴度,成功构建了靶向PRLR的CAR-T细胞.结果表明,制备慢病毒的最优条件为:PRLR-CAR ∶ psPAX2 ∶ pVSVG质量比为3 ∶ 2 ∶ 1,且和转染试剂以质量比1 ∶ 2混合,经浓缩后滴度可达到1.88×107 TU/ml.以此慢病毒感染人T细胞,并经终浓度0.5 μg/ml嘌呤霉素筛选2d后可得到CD4阳性表达率约为55％,CD8阳性表达率约为35％的CAR-T细胞,且PRLR-CAR阳性表达率大于50％.构建的新型靶向PRLR的CAR-T细胞可为乳腺癌的免疫治疗提供参考.