大肠杆菌O8/O9/O149与O157血清型多重PCR方法的建立及应用

为了建立一种可以同时鉴定大肠杆菌O8、O9、O149与O157血清型的快速高效多重PCR检测方法,本研究根据GenBank中大肠杆菌O8、O9、O149、O157血清型的O 抗原合成基因簇特异性靶标基因序列,设计合成4对PCR引物,优化引物浓度及反应条件,建立多重PCR检测方法.然后,分析多重PCR方法的特异性、敏感性,并利用建立的多重PCR方法检测大肠杆菌临床分离株验证该方法的可靠性.特异性结果显示,多重PCR方法可有效鉴定大肠杆菌O8、O9、O149、O157血清型,而检测其他血清型大肠杆菌及菌种时无扩增条带,表明多重PCR方法具有较好的特异性.敏感性结果显示,多重PCR方法检测大肠杆菌O8、O9、O149、O157血清型的菌液和DNA的最低检测限分别为105 CFU、105 CFU、103 CFU、103 CFU和1 ng、100 pg、10 pg、10 pg.临床分离株检测结果显示,与传统血清凝集试验相比,多重PCR方法更准确、可靠.本研究成功建立了一种可特异、灵敏、快速鉴定大肠杆菌O8、O9、O149与O157血清型的多重PCR方法,为大肠杆菌O8、O9、O149与O157血清型检测和流行病学调查提供了新的技术手段.