柯萨奇病毒A组4型生物化学特性及免疫原性分析

对引起手足口病的肠道病毒A组4型进行生物化学特性及免疫原性的研究.利用大肠杆菌表达结构蛋白全长或部分片段的GST融合蛋白,纯化CV-A4病毒颗粒,制备兔抗CV-A4 VP1～VP4蛋白及抗CV-A4病毒颗粒抗血清.以免疫印迹法(Western blotting,WB),结合SDS-PAGE电泳法,对CsCl密度梯度纯化的CV-A4的空心颗粒(EP)与实心颗粒(FP)的蛋白组分、纯度、多聚蛋白酶剪切进行分析.以微量中和法测定以上6种抗原免疫的兔或小鼠血清中和抗体效价,评估免疫原性.WB和间接免疫荧光法证明了抗体特异性.EP由VP0、VP1和VP3构成,而FP的VP0被剪切,故由VP1-VP4构成.EP和FP比例分别为41％和59％.CsCl密度分别为1.26 g/cm3和1.34 g/cm3,纯度分别为70.5％和96.3％.中和试验显示,兔抗全病毒抗体具有中和作用,而兔抗CV-A4 VP1～VP4结构蛋白抗体不具有中和作用.免疫原性强弱为:FP＞EP＞VP1-VP4.本研究建立了 CV-A4纯化病毒结构蛋白的分析方法,研究了重组病毒蛋白及2种病毒颗粒的免疫原性及免疫持久性.对包括CV-A4的手足口病多价疫苗的研发策略以及质量控制具重要意义.