鸭源鸡杆菌tolC基因序列特征分析、原核表达及免疫原性分析

tolC基因广泛存在于革兰氏阴性菌中,其表达的TolC蛋白(TolC family protein,TolC)是一种外膜通道蛋白,介导多种不同类型化合物的胞外转运过程,在细菌的生物学功能中发挥着重要作用.解析鸭源鸡杆菌(Gallibacterium anatis)tolC基因特征及TolC蛋白的特性对于该病防控具有重要意义.为研究鸭源鸡杆菌tolC基因及其编码蛋白的结构特征和其作为抗原的潜能,本研究对28株鸭源鸡杆菌分离株tolC基因序列进行测定及系统发育分析;以PDS-RZ-1-SLG菌株为研究对象,利用生物信息学方法对TolC蛋白的理化性质及结构进行预测,并进行克隆、表达及抗原特性分析.结果表明,tolC基因在鸭源鸡杆菌中国分离株中普遍存在,全长1371 bp,核苷酸序列高度保守,同源性为92.1％～100％,与鸡杆菌复合群(Gallibacterium genomosp)1和2亲缘关系最近;TolC蛋白由456个氨基酸编码,理论分子质量为51.1 kD,是一个稳定的、亲水的α型分泌性膜蛋白,无跨膜结构域,但有1个信号肽序列和10个主要B细胞表位.SDS-PAGE和Western blot结果表明获得了约45 kD的重组蛋白,且该重组蛋白与鸭源鸡杆菌阳性血清可发生特异性反应,且能与TolC多克隆抗体兔血清发生特异性结合,证实了TolC的反应原性与免疫原性.本研究为进一步研究TolC蛋白生物功能提供基础信息,同时为鸭源鸡杆菌新型疫苗的开发提供理论依据.