锌转运蛋白8在酿酒酵母中的重组表达及其抗原性分析

锌转运蛋白8(zinc transporter 8,ZnT8)是Ⅰ型糖尿病的重要候选抗原,基于ZnT8所开发的自身抗体检测试剂盒可用于帮助诊断I型糖尿病,相关产品已在欧美国家上市.目前,国内正在积极开发I型糖尿病检测试剂盒,由于国内尚未建立活性ZnT8的重组生产体系,因此这一关键原料严重依赖进口.本研究主要利用酿酒酵母系统开展了ZnT8的重组表达研究.首先,设计了ZnT8的多种抗原形式,分别为C端单倍体蛋白(C)、C端二倍体(C-C)以及N端和C端串联体蛋白(N-C),并使用酿酒酵母系统对上述蛋白进行了重组表达与纯化.随后,通过桥连法ELISA对纯化蛋白进行了抗原性测试,检测13位I型糖尿病病人血清及16位健康志愿者血清后发现:C、N-C、C-C蛋白具有相似的检出率,分别为53.8％(7/13)、61.5％(8/13)及53.8％(7/13);3组的特异性均为100％(16/16);N-C蛋白相对其他2个蛋白而言,其在P3、P4、P8阳性样本上的检测值提高90％以上,表明具有更好的血清抗体识别能力.最后,选取N-C蛋白做进一步的血清样本测试,并将测试结果用ROC曲线进行敏感性及特异性表征,结果表明,与进口金标抗原相比,本方法敏感性无明显差异,特异性有待提高.综上可见,本研究基于酿酒酵母表达生产的ZnT8N-C串联体蛋白有潜力作为Ⅰ型糖尿病体外诊断试剂开发中的国产替代原料.