太平洋牡蛎中类FUT10蛋白的原核表达及免疫印迹鉴定

目的 获取太平洋牡蛎类α1,3岩藻糖基转移酶10(α1,3 fucosyl-transferase 10-like,FUT10-like)蛋白并探究与人FUT10的免疫相似性.方法 本研究基于课题组前期克隆完整的类FUT10基因cDNA,依照大肠杆菌表达蛋白的密码子偏爱性,利用GenSmart Optimization在线优化软件对类FUT10基因开放阅读框序列进行优化并合成,亚克隆至载体pET-28a(+),得到重构质粒pET-OFu3,转入大肠杆菌BL21(DE3),通过异丙基-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-D-thiogalactoside,IPTG)诱导后获取目的蛋白,进行蛋白质印迹法(Western blot)鉴定.结果 在37℃、IPTG终浓度为1.0 mmol/L诱导4 h后,出现蛋白分子量大小约为55 kDa的条带.该蛋白条带与抗6xHis(组氨酸标签)抗体、抗人FUT10抗体均能发生特异性结合.结论 优化后的类FUT10蛋白与人体转移酶FUT10具有相似的免疫原性,类FUT10蛋白的可溶性表达为探究太平洋牡蛎体内Ⅱ型血型抗原合成路径提供研究基础.