欧洲型PRRSV竞争ELISA抗体检测方法的建立及应用

为快速准确地监测1型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV-I)在我国的流行情况,本研究以分子筛纯化灭活的PRRSV-1(ZD-1株)为包被抗原,利用PRRSV-1的特异性单克隆抗体(MAbEU-1)为竞争抗体,经条件优化,建立了检测PRRSV-1的竞争ELISA(EU-C-ELISA)方法.反应条件优化结果显示,最佳抗原包被量为455 ng/孔,PRRSV-1 MAbEU-1的最佳稀释度为1∶8.EU-C-ELISA结果判定标准:血清样品抑制率PI≥45％时判定为阳性,PI＜45％判定为阴性.特异性试验结果显示,该方法仅能检测PRRSV-1阳性血清,与各谱系PRRSV-2及其他常见猪病毒和细菌阳性血清均无交叉反应;敏感性试验结果显示,该方法能检测出16倍稀释的阳性标准血清,并且最早可在PRRSV ZD-1株感染猪后第7 d检测到血清中PRRSV-1抗体阳转;批内和批间重复性试验的变异系数均小于5％,对比试验结果显示该方法特异性和敏感性均显著优于现有试剂盒对PRRSV-1抗体的检测.利用该方法对2020年采自黑龙江、辽宁、河北、山东省10个猪场的432份临床血清样品进行检测,2个猪场检出PRRSV-1抗体阳性,猪场阳性率达20％,样品总阳性率为15.0％,显示PRRSV-1抗体已存在于我国部分地区猪群中.本研究在我国首次建立了 PRRSV-1竞争ELISA抗体检测方法,为监测PRRS-1在我国的流行情况及科学防控该病提供了检测手段.