牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体的制备及其在该病毒检测中的应用

为制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的单克隆抗体(MAb),并应用于BVDV检测中,本研究采用蔗糖密度梯度离心法纯化BVDV ZD-2018株,以纯化的该BVDV全病毒为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,采用间接ELISA方法筛选阳性克隆、有限稀释法进行5次克隆纯化,获得6株稳定分泌抗BVDV的杂交瘤细胞株,分别 命名为 6D2F2、4H6A6、1D8C7、IG8D8、1C7E7 和 3A8E1,其中 6D2F2、1G8D8、1C7E7 和3A8E1属于IgG2a亚类,4H6A6属于IgG1亚类,1D8C7属于IgG2b亚类.采用间接ELISA方法评价了 6株MAb的特异性,结果显示,6株MAb与猪瘟病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛细小病毒、牛轮状病毒、牛呼吸道合胞体病毒和牛副流感病毒3型均无交叉反应.间接免疫荧光试验结果显示,所制备的6株MAb均能够与BVDV反应;利用原核表达的BVDV结构蛋白C、E0、E1和E2对获得的MAb进行western blot鉴定,结果显示,MAb 6D2F2、4H6A6、1D8C7和1G8D8均能够特异性识别BVDVE2蛋白,MAb 1C7E7和3A8E1均能够特异性识别 BVDV EO蛋白.进一步基于MAb4H6A6制备了小鼠腹水(效价为1∶106),经抗体纯化和辣根过氧化物酶标记后建立免疫组化方法,用于检测人工感染BVDV的犊牛肠道组织中的病毒,结果显示,利用本实验制备的Mab初步建立的免疫组化方法可定性检测组织中的BVDV.本研究制备的BVDV Mab为BVDV快速检测方法的建立及其病原学研究奠定了物质基础.