基于绵羊肺炎支原体Enolase蛋白建立间接ELISA抗体检测方法

旨在建立一种检测绵羊肺炎支原体(Mo)血清抗体的间接ELISA方法,笔者构建了 Mo Enolase基因原核表达载体,诱导表达后,纯化的重组蛋白用Western-blot分析其反应原性.以重组蛋白为包被抗原,建立了 Mo间接ELISA抗体检测方法.结果显示,重组蛋白得到可溶性表达,Western-blot证实具有良好的反应原性.间接ELISA反应条件优化结果显示,包被抗原浓度为2mg/L,37℃2h,封闭条件为含10g/L BSA的PBS,4℃过夜,待检血清稀释度为1∶50,37℃1 h,酶标二抗最佳稀释度为1∶4 000,37℃1 h,底物最佳显色条件为37℃避光10min.分别利用38份阴性血清、38份阳性血清确定临界值为S/P=0.365.用该方法与间接血凝法对180份血清进行检测,两者符合率为81.11％.结果表明,本研究建立的间接ELISA方法敏感、特异,具有良好的临床应用前景.