体外诱导糖尿病小鼠模型中性粒细胞胞外诱捕网的研究

目的 建立佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)诱导糖尿病小鼠骨髓来源中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)形成的模型,为研究糖尿病足溃疡NETs产生和调节机制奠定基础.方法 提取链脲佐菌素(streptozocin,STZ)诱导的糖尿病小鼠骨髓来源中性粒细胞,使用100、200、400nmol/L的PMA刺激细胞3～7h.采用核酸染料Sytox Green染色胞外DNA,通过激光共聚焦显微镜检测各组网状结构的形成、荧光免疫组化法检测瓜氨酸化组蛋白H3(citrulline histone H3,Cit-H3)的表达、荧光探针测定细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,电子扫描显微镜下观察NETs形成情况.结果 各组PMA刺激中性粒细胞,刺激5h形成少量NETs,6h时形成大量网状NETs结构,其中100nmol/L PMA处理组有明显NETs生成,7h时各组NETs开始消退;同时100nmol/L PMA刺激中性粒细胞6h时Cit-H3的表达以及ROS水平显著升高;扫描电子显微镜可见NETs网状结构.结论 100nmol/L PMA刺激STZ诱导的糖尿病小鼠骨髓中性粒细胞6h,可显著促进Cit-H3表达和ROS生成,诱导NETs生成,可作为研究糖尿病小鼠NETs研究的模型.