甘肃省山丹地区马子宫内膜炎主要病原菌的分离鉴定及多重PCR检测方法的建立

旨在对甘肃省山丹地区马子宫内膜炎主要致病菌进行分离鉴定并建立一种病原菌多重PCR(multiplex poly-merase chain reaction,MPCR)检测方法.根据病原菌分离鉴定结果,选取主要致病菌金黄色葡萄球菌(Saphylococ-cus aureus,S.aureus)、大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)和马链球菌(Streptococcus equi,S.equi)进行多重 PCR 检测方法的建立.提取3种标准菌株基因组并基于nuc、phoA、fneB的保守区域设计3对特异性引物,扩增预期核酸片段分别为1 319,385,109 bp,进行引物特异性MPCR验证同时对扩增条件中的退火温度、引物浓度优化,建立检测3种病原菌的多重PCR,完成样品检测评估.结果表明,山丹地区马子宫内膜炎主要致病菌为金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和马链球菌,设计的引物与无乳链球菌(Streptococcus agalactiae,S.agalactiae)、肺炎链球菌(Pneumococcus)无交叉反应,建立的多重PCR检测方法退火温度在59.4℃时最佳;在引物为0.3～1.0 μL优化区间内,S.aureus、E.coli和S.equi引物最佳用量分别为0.5,0.5,1.0 μL,临床样品检测结果与病原菌分离鉴定结果一致.本研究成功分离鉴定了甘肃省山丹地区马子宫内膜炎的主要病原菌并建立多重PCR检测方法,为马子宫内膜炎的快速诊断和防控提供了技术支持.