电穿孔法转化齐整小核菌

[目的]建立齐整小核菌(Sclerotium rolfsii)的电穿孔法转化方案,以实现经济、快速地遗传转化.[方法]将齐整小核菌gpd基因启动子控制的basta抗性基因bar与红色荧光蛋白基因DsRed Max组成的融合蛋白表达盒,通过电击转入野生型齐整小核菌细胞中,筛选转化子并进行PCR与荧光观察验证.在此基础上,测试了不同电压、脉冲时间、外源DNA片段与受体细胞比例等条件下的转化效率,以得到优化的电转化参数.最后,采用优化的条件,尝试转化多种抗性基因与荧光蛋白融合表达盒以测试其可用性.[结果]成功得到了 bar、sdhR与aphI基因的转化子.[结论]成功建立了优化的齐整小核菌电穿孔转化法.优化的参数条件为电压2 kV/cm、脉冲时间1ms、DNA/匀浆细胞比例3 μg/300mg,电击1次.