BIRC5对山羊睾丸细胞周期、凋亡的影响

旨在在克隆山羊BIRC5基因的基础上,通过过表达或者敲低BIRC5基因表达揭示BIRC5基因对山羊睾丸细胞周期和凋亡的调控作用,为进一步完善BIRC5基因功能奠定基础.本研究以3只3日龄3 kg左右健康简州大耳羊公羊脾脏组织为模板,利用RT-PCR技术克隆山羊BIRC5基因CDS区序列,并进行生物信息学分析.将克隆回收产物连接真核表达载体,从而构建pcDNA3.1(+)-BIRC5.根据山羊BIRC5基因序列设计并筛选有效siRNA.将pcDNA3.1(+)-BIRC5和siRNA分别转染山羊睾丸细胞后,利用Western blot检测BIRC5蛋白表达,利用流式细胞仪检测细胞周期与凋亡,利用实时荧光定量PCR技术检测对凋亡相关基因Bax、Caspase3、Caspase7、Bcl-2、p53、BCL2L11和PARP1的表达.结果,成功扩增山羊BIRC5基因序列,长度为506 bp,包含5'UTR28 bp,CDS区429 bp,3'UTR49 bp,编码142个氨基酸残基,且与牛亲缘关系最近.过表达BIRC5基因后抑制了细胞凋亡,且细胞被阻滞于G2/M+S期;同时可下调Caspase7、p53、BCL2L11、Bcl-2和Bax基因mRNA的表达,但Caspase3和PARP1 mRNA表达无显著变化.而敲低BIRC5基因表达后可显著促进细胞凋亡的发生,且细胞被阻滞于细胞被阻滞于G0/G1期,而Caspase3、Caspase7和PARP1 mRNA表达显著上升,p53和Bcl-2的表达显著下降,Bax和BCL2L11表达无显著变化.BIRC5基因可抑制山羊睾丸细胞的凋亡,并促进山羊睾丸细胞被阻滞于G2/M+S期.研究结果为进一步深入全面研究BIRC5基因的功能提供重要的试验数据.