S100A9通过增加小鼠星形胶质细胞的谷氨酸分泌促进神经元损伤

目的:研究钙防卫蛋白S100A9刺激体外星形胶质细胞后细胞外谷氨酸浓度变化及其对神经元影响和调控机制.方法:分离培养新生C57BL/6小鼠大脑皮层星形胶质细胞和神经元;Amplite荧光法检测星形胶质细胞培养上清谷氨酸浓度;Real time RT-PCR和Western Blot分别检测星形胶质细胞谷氨酸转运体(GLT-I)mRNA和蛋白表达;Fluo-4荧光探针法检测星形胶质细胞胞内Ca2+浓度;转录组测序并结合KEGG分析筛选星形胶质细胞谷氨酸浓度变化的调控机制;S100A9刺激星形胶质细胞的培养上清(CS)干预神经元后,末端脱氧核苷酸转移酶标记法(TUNEL)检测神经元凋亡,CCK-8试剂盒检测神经元存活.结果:S100A9刺激星形胶质细胞后细胞外谷氨酸浓度增加,GLT-1 mRNA和蛋白表达减少,细胞内Ca2+浓度增加.差异表达基因KEGG富集在核因子-кB(NF-кB)信号通路、toll样受体(TLRs)信号通路和肿瘤坏死因子(TNF)信号通路等.培养上清组神经元凋亡率高于对照组.结论:S100A9可能通过激活TLR4/NF-кB通路抑制GLT-1依赖的谷氨酸摄取和促进星形胶质细胞Ca2+依赖的谷氨酸释放,上调细胞外谷氨酸水平,这可能进一步导致神经元损伤.