非洲猪瘟病毒CD2v胞外区蛋白的真核表达及其单克隆抗体的制备与功能分析

目的 利用真核表达系统制备非洲猪瘟病毒(ASFV)CD2v分子N端胞外区融合蛋白,并作为抗原免疫和筛选特异性识别CD2v单克隆抗体.方法 以pcDNA3.1-CD2v-HA质粒(含ASFV-BA71v株EP402R基因全长编码序列和HA标签)为模板,扩增CD2v蛋白胞外区碱基序列,构建真核表达载体pcDNA3.1-N-CD2v-His,通过Expi-293表达系统获得重组N-CD2v-His蛋白.将纯化后的蛋白免疫小鼠,利用杂交瘤细胞技术制备特异识别CD2v分子单克隆抗体,对获得的抗体经酶联免疫吸附实验(ELISA)、Western印迹以及间接免疫荧光等方法进行鉴定.结果 N-CD2v-His融合蛋白基因被成功构建到真核表达载体上,转染Expi-293F细胞收获重组蛋白,纯蛋白经SDS-PAGE分析发现,N-CD2v-His融合蛋白条带呈高度糖基化修饰的梯状分布.用该融合蛋白免疫小鼠,经杂交瘤细胞筛选,获得2株高亲合活性单克隆抗体,2株抗体经间接ELISA、Western印迹及免疫荧光实验等检测均能特异识别糖基化修饰的CD2v全长蛋白.结论 成功制备了抗CD2v特异性单克隆抗体,为进一步开发新型ASFV抗原检测或治疗方法奠定了基础.