沉默调节蛋白6对胶质母细胞瘤抑制机制

目的 探讨沉默调节蛋白6(SIRT6)在胶质母细胞瘤(GBM)疾病进展中的作用.方法 将GBM细胞U87MG分为2组,分别在常氧和缺氧条件下培养,蛋白质印迹法分析SIRT6表达.采用慢病毒感染分别构建SIRT6过表达及沉默的U87MG细胞,CCK-8实验检测过表达和沉默SIRT6后U87MG细胞活性的变化,并用蛋白质印迹法检测对糖酵解途径的影响.最后,在SIRT6过表达及沉默的U87MG细胞中加入替莫唑胺(TMZ),CCK-8实验检测过表达和沉默SIRT6的U87MG细胞对TMZ的药物敏感性,蛋白质印迹检测蛋白表达的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡水平.结果 缺氧实验:与常氧组细胞比较,缺氧组SIRT6受到抑制,差异有统计学意义,t=11.920,P=0.000 3;而诱导转录因子1α(HIF1α;t=9.888,P=0.000 6)、乳酸脱氢酶(LDHA;t=11.890,P=0.000 3)、肌肉丙酮酸激酶同工酶 2'(PKM2;t=12.060,P=0.000 3)及葡萄糖转运体1(GLUT1;t=18.190,P＜0.000 1)蛋白表达水平上调.细胞活性和糖酵解实验:同OE-NC组比较,OE-SIRT6组细胞活性在第5(t=4.869,P=0.008 2)和7天(t=6.197,P=0.003 4)被抑制;同sh-NC组比较,sh-SIRT6组细胞活性在第5(t=3.066,P=0.037 5)和7天(t=5.017,P=0.007 4)被上调.蛋白质印迹检测结果显示,与 OE-NC 组比较,OE-SIRT6 组抑制 HIF1α(P=0.000 3)、LDHA(P＜0.000 1)、PKM2(P=0.010 6)和 GLUT1(P=0.001 2)蛋白表达;与 sh-NC 组比较,沉默 sh-SIRT6 能够上调 HIF1α(P＜0.000 1)、LDHA(P＜0.000 1)、PKM2(P＜0.000 1)和 GLUT1(P＜0.000 1)蛋白表达.OE-SIRT6 组细胞葡萄糖摄取量为(0.82±0.21)mmol/g,乳酸产生水平为(0.12±0.03)mmol/g,均低于 OE-NC 组,P=0.009 0.与 sh-NC 组比较,sh-SIRT6 组细胞的葡萄糖摄取量为(1.34±0.10)mmol/g,乳酸分泌水平为(0.46±0.05)mmol/g,均上调,均P＜0.000 1.药物敏感性实验:CCK8实验结果显示,缺氧条件能够上调U87MG细胞在TMZ药物压力下的细胞活性,P=0.013 2.在缺氧背景下,同TMZ组比,过表达SIRT6能够增强TMZ对U87MG细胞的抑制作用,P=0.000 5;而沉默SIRT6能上调细胞对TMZ的抗性作用,P＜0.000 1.流式细胞术检测结果表明,同TMZ组(8.59±0.69)％比,OE-SIRT6+TMZ组细胞凋亡率(18.0±2.15)％上调,P=0.002 0;而 sh-SIRT6+TMZ 组 U87MG 细胞的凋亡率(1.69±0.96)％下降,P=0.000 5.结论 SIRT6可以通过HIF1α/糖酵解途径抑制GBM U87MG的增殖,促进其凋亡并增强缺氧状态下GBM U87MG对TMZ的药物敏感性,发挥抑癌作用.