YTHDF2对肝星状细胞活化增殖与迁移能力的影响

目的 探究 YTHDF2 对肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)活化增殖与迁移能力的影响.方法 使用 5μg·L-1 TGF-β1 诱导HSC-T6 细胞活化,使用YTHDF2-siRNA构建YTHDF2 沉默模型,实验分为Control组、TGF-β1 组、si-NC组和 si-YTHDF2 组.Dot blot 方法检测 N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)水平的变化;Western blot 和 RT-qPCR方法检测活化HSCs中YTHDF2 的表达变化和纤维化关键指标α-SMA、Collagen Ⅰ的表达变化;CCK-8、Edu 染色方法检测HSCs增殖能力;细胞划痕实验和Transwell迁移实验检测HSCs 的迁移能力.结果 在 TGF-β1 诱导活化的HSCs中YTHDF2 的表达明显增高,而在si-YTHDF2 组中水平明显下降;与Control组相比,TGF-β1 组中m6A水平以及α-SMA、Collagen Ⅰ的水平明显升高,且HSCs的增殖和迁移能力也明显增高;而与si-NC组比较,沉默YTHDF2 后,m6A水平、α-SMA和Collagen Ⅰ mRNA和蛋白水平均明显降低,同时HSCs的增殖和迁移能力明显被抑制.结论 YTHDF2可促进α-SMA和Collagen Ⅰ的表达,同时可促进HSCs的增殖和迁移能力,进而促进HSCs活化和肝纤维化的进展,这一过程可能是与m6A甲基化修饰有关.