脂肪干细胞来源的外泌体对局限性硬皮病成纤维细胞生物学功能的影响

目的:探索来源于健康人脂肪干细胞(ADSC)的外泌体对局限性硬皮病成纤维细胞(LSFs)纤维化的体外调控作用。方法:取2021年1月至2022年1月中国医学科学院北京协和医院整形外科10例健康人吸脂手术剩余脂肪组织，体外分离培养ADSC，以超速离心法收集其外泌体(ADSC-Exo)；取同期15例局限性硬皮病患者患处皮肤组织，体外分离培养成纤维细胞。采用不同方向的诱导分化染色、纳米粒子追踪分析、透射电子显微镜、PKH26染色和蛋白质印迹法对ADSC及ADSC-Exo进行鉴定。通过细胞外囊泡分泌抑制实验检验ADSC是否通过其外泌体影响LSFs纤维化标志物[Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)]的表达。取被ADSC-Exo干预的LSFs，通过CCK-8法、划痕实验检测LSFs的增殖和迁移能力。采用实时荧光定量PCR、免疫荧光染色和蛋白质印迹法检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、α-SMA、转化生长因子β(TGF-β)和p-Smad2/3的表达情况。两组比较采用独立样本 t检验；多组比较采用方差分析，组间两两比较采用SNK- q检验。 结果:成功于体外分离并培养ADSC和LSFs，并提取ADSC-Exo，且证明ADSC-Exo可以内化到LSFs中发挥作用。细胞外囊泡分泌抑制实验证明，ADSC可通过分泌细胞外囊泡降低LSFs的纤维化标志物表达；CCK-8法、划痕实验结果显示，ADSC-Exo干预后LSFs的增殖和迁移能力降低；实时荧光定量PCR、免疫荧光染色和蛋白质印迹结果显示，相较于对照组，ADSC-Exo干预组的Ⅰ型胶原、α-SMA、TGF-β和p-Smad 2/3表达显著降低。结论:在体外，ADSC-Exo可以通过抑制TGF-β/Smad通路来影响LSFs的生物学功能和降低纤维化标志物的表达。