5α-羟基木香酸抑制VEGF164诱导大鼠脉络膜血管内皮细胞增殖、迁移及血管形成

目的 探讨5α-羟基木香酸(5α-hydroxycostic acid,5α-HA)体外抑制脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)模型的作用及其机制.方法 体外培养大鼠脉络膜血管内皮细胞(choroidal vascular endothelial cells,CECs)后分为(n=3):空白对照组、模型组[30 ng/mL 抗血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)164]、干预组(30 ng/mL VEGF164+100 μmol/L 5α-HA)、抑制剂组[30 ng/mL VEGF164+5 μmol/L Semaxanib(VEGFR2 特异性阻断剂)].CCK-8 实验检测各组CECs的增殖情况,细胞划痕实验、Transwell实验以及Matrigel基质胶管腔形成实验分别观察各组CECs的增殖、迁移以及管腔形成.RT-qPCR检测各组细胞渗漏相关因子如血管生成素2(Angiopoietin 2,Ang 2)、血管内皮钙黏蛋白(VE-Cadherin)、紧密连接蛋白(ZO-1)的mRNA水平的表达;Western blot检测各组细胞信号通路及渗漏相关蛋白P-VEGFR2、P-Tie2、P-FAK、VE-Cadherin、ZO-1、Occudin的表达;免疫荧光检测各组细胞中Ang 2蛋白的表达,统计分析上述各组间的指标差异.结果 CCK-8实验表明:与模型组比较,干预组5α-HA作用于CECs后能抑制CECs的异常增殖(P＜0.01).细胞划痕实验、Transwell实验以及Matrigel基质胶管腔形成实验表明:干预组能扭转模型组VEGF164引起的CECs迁移及管腔形成(P＜0.01).RT-qPCR结果显示:干预组能抑制模型组中Ang 2 mRNA的上调以及VE-Cadherin和ZO-1的下调(P＜0.01).Western blot结果显示:干预组能减少模型组中 P-VEGFR2、P-Tie2 及 P-FAK 蛋白的表达(P＜0.01),同时上调 VE-Cadherin、ZO-1 以及 Occudin 蛋白的表达(P＜0.05).细胞免疫荧光实验结果显示,与模型组比较,干预组能减少模型组中Ang 2蛋白的表达(P＜0.01).结论 5α-HA可能通过抑制VEGFR2、Tie2双途径磷酸化以及抑制VEGFR2/FAK信号通路抑制VEGF164诱导的CECs增殖、迁移以及管腔形成.