不同保存温度及高温灭活处理对RNA病毒保存效果的影响

目的:探究不同保存温度及高温灭活处理对在常用的RNA病毒样本保存液中保存效果的影响.方法:以禽IBV冠状病毒(弱毒株)作为模型,采用等渗盐溶液Hank's液、胍盐保存液和市售商品化CWY076保存液保存禽IBV冠状病毒时,比较高温灭活过程对病毒核酸完整性和后续荧光定量PCR核酸检测的影响.结果:保存在常用Hank's液中的样本,经60 ℃灭活30 min后采用荧光定量PCR检测循环阈值(Ct值)显著增加(P<0.05),且病毒检测灵敏度仅达到病毒原液的10-6稀释梯度;而保存在自配胍盐保存液中的样本在-80 ℃和4 ℃下保存7 d,60℃灭活30 min后,病毒检出率与检测灵敏度则无明显影响;但在37 ℃保存7d后,检测灵敏度降为10-6稀释梯度;保存在商品化CWY076保存液(康为世纪产品)中的样本,在-80℃、4℃和37℃下保存7d后,以及60 ℃灭活30 min,对病毒检出率与灵敏度均无明显影响,在10-7稀释梯度的检出率仍为91.70％.结论:采用Hank's保存液无法在灭活处理过程中有效保存RNA病毒样本,而在胍盐保存液和市售CWY076保存液中均能在60℃灭活处理后有效保证后续荧光定量PCR核酸检测过程中病毒RNA核酸的检出率,其中在CWY076保存液中保存的效果优于其他保存液,即便在37 ℃条件下保存7d后,RNA病毒仍保持很高的检出率和检测灵敏度.